用低温取代法研究金鱼胚胎在低温下的超微结构图象

本文用低温取代法,研究了金鱼胚胎经两种不同的降温程序冷却到液氮温度后的超微结构图象。研究表明:若金鱼胚胎置入低浓度的抗冻剂溶液,慢速降温到-20℃后再快速浸入液氮,胚胎中有许多大的冰晶形成。这些大冰晶严重地破坏了金鱼胚胎的超微结构。而若将金鱼胚胎置入高浓度的玻璃化溶液中快速浸入液氮,胚胎外溶液可实现玻璃态固化。虽然胚胎内部仍有许多小的冰晶形成,但其体积比慢速降温时小得多,它们对胚胎细胞结构的影响也较小。     

牛体外受精卵的冷冻保存研究

将胚胎分别以PBS 20?S 10%乙二醇和PBS 20?S 10%甘油为冷冻保护液,或者在PBS 20?S 10%乙二醇中添加或不加蔗糖为保护液,用常规冷冻方法进行冷冻处理.胚胎保存1～18天后将其解冻,并在发育用培养液TCM199 10%OCS(发情母牛血清) 丙酮酸钠中培养48小时.结果表明解冻胚的形态正常率和培养后的发育率在乙二醇处理组和甘油处理组中分别为81.2%(13/19)、56.2%(9/16)和84.6%(11/13)、46.2%(6/13),两组之间无量著差异.在添加蔗糖和不加蔗糖的处理组中,胚胎解冻后的形态正常率和培养后的发育率分别为75.0%(15/20)、55.0%(11/20)和83.3%(15/18)、61.1%(11/18),两组之间也无明曼差异.试验结果证明,用乙二醇为防冻剂对牛体外受精胚胎进行冷冻保存,其效果相当于或略优于甘油,在乙二醇处理组中,添加蔗糖与否并不影响其冷冻效果.     

胚胎分割、分割胚的体外培养及移植

用玻璃微针对小鼠胚胎进行分割,分割的裸半胚经体外培养和移植到受体后,获得由半胚发育的仔鼠。小鼠早期胚胎(2细胞,8细胞阶段)在链霉蛋白酶中软化透明带后,用直径为0.5μm的玻微针徒手对胚胎进行切割。切割的半胚体外培养24～48h,观察半胚的活力、发育率、发育阶段及胚泡的大小与未切割的正常胚胎进行比较。共切割胚胎342枚,切割后成活的半胚为411枚,半胚成活率为60.08％(411/682)。2细胞和8细胞阶段切割的半胚,成活率分别为     

酪氨酸酶抑制法与斑马鱼评价模型的比较研究

传统的酪氨酸酶抑制法与新型的斑马鱼评价模型之间是否存在优势互补,斑马鱼模型是否具有广泛适用性,这两个问题对美白剂评价方法的发展具有较大的意义.采用酪氨酸酶抑制法和斑马鱼评价模型同时评价常用美白剂包括曲酸、熊果苷、抗坏血酸、光甘草定和氢醌的美白作用.结果证明,用这两种方法评价曲酸和熊果苷都呈现阳性反应,说明两种方法具有一致性;但是,抗坏血酸和光甘草定在酪氨酸酶活性抑制法中显示出抑制作用,但对斑马鱼色素的形成并没有明显的抑制,这又说明两种方法具有矛盾性.酪氨酸酶抑制法能够阐述美白作用的机制包括单酚酶抑制和双酚酶抑制,而斑马鱼评价模型却能够评价美白剂的安全性包括致畸率和死亡率.总之,两种评价方法各具优缺点,两种方法的联合应用能够在美白剂的评价上实现优势互补.     

花生成熟胚叶体细胞胚形成过程中的过氧化物酶同工酶研究

以花生成熟胚的幼叶做外植体诱导体细胞胚发生．从外植体培养到子叶胚形成期间,可溶性蛋白浓度初期下降,以后相对稳定;过氧化物酶活性逐渐升高,过氧化物同工酶谱带由２条陆续增加到１０条,球形胚形成以后同工酶谱带不再变化．     

模式生物斑马鱼在听觉领域的应用

耳聋疾病严重影响着患者的生存质量。选择合适的模式生物,对耳聋疾病进行研究,可为该疾病的治疗和药物研发等提供可靠数据。斑马鱼是近年来兴起研究的一种新型脊椎动物模式生物,具有独特的自身优势,其在听觉领域的应用正日益受到人们的关注。基于此,就斑马鱼在听觉领域的研究优势、应用进展以及常用的技术方法等进行了综述。     

斑马鱼仔鱼的人工培育实验

饵料投喂和水质是影响斑马鱼仔鱼存活率的主要因素,分别只投喂草履虫和卤虫,仔鱼存活率仅为37.8%。斑马鱼仔鱼的死亡高峰期主要在第13～15天之间,适量添加蛋黄颗粒能使此阶段的死亡率降低约20%。土霉素能预防仔鱼发育过程中病原微生物感染的发生,提高仔鱼的存活率。     

异烟肼对斑马鱼幼鱼发育毒性及运动行为学的影响

以斑马鱼幼鱼为研究对象,研究异烟肼对幼鱼发育毒性和行为学的影响。 用不同浓度的异烟肼分别处理发育至72 hpf的斑马鱼幼鱼,观察幼鱼的死亡率、畸形率及形态变化,分析幼鱼行为学轨迹。 异烟肼（≥4 mmol/L）对斑马鱼幼鱼有致死作用,随着浓度的增加和作用时间延长而增强。异烟肼对斑马鱼幼鱼的发育过程有致畸作用,表现为脊柱弯曲、卵黄囊吸收延滞、心包水肿、鱼鳔缺失、体长发育延迟和器官空泡化等。随着给药浓度的增加和作用时间的延长,异烟肼组幼鱼行为轨迹减少,运动次数和运动速度显著降低。结果表明,异烟肼（≥4 mmol/L）对斑马鱼幼鱼具有致死和致畸作用,对幼鱼的运动行为有抑制作用,并且呈现时间和剂量依赖性。     

铜、汞和铅对斑马鱼仔鱼肝脏发育的影响

以肝脏绿色荧光转基因斑马鱼T3（lfabp:EGFP）为模型,研究水环境典型重金属污染物铜（CuCl2）、汞（HgCl2）和铅（Pb（Ac）2）在较低浓度暴露下对仔鱼（72~144 hpf）肝脏发育的影响。结果显示,各暴露组存活率均在95%以上;CuCl2和HgCl2在1 μmol/L时均能够引起鳔发育或充气异常;3种化合物均能够显著减小肝脏荧光面积和光密度。相同暴露浓度下,CuCl2抑制肝脏发育的能力强于Pb（Ac）2和HgCl2,但HgCl2在0.01 μmol/L时就能够显著抑制肝脏发育;CuCl2和Pb（Ac）2抑制lfabp表达量的能力强于HgCl2,且Pb（Ac）2在0.01 μmol/L时就能够显著抑制lfabp表达。结果表明,3种重金属化合物均能够显著抑制肝脏发育;转基因斑马鱼仔鱼可以作为检测环境污染物肝脏发育毒性的首选模型。     

柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导及植株再生

为探索柳杉种子合子胚的愈伤组织诱导技术,选取柳杉4个家系,采集其尚未完全成熟的种子进行愈伤组织的诱导,并经器官发生再生途径得到再生植株。利用6-BA、2,4-D等激素种类及其浓度的正交设计,研究各因素及其交互作用对柳杉种子合子胚愈伤组织诱导的影响。结果发现:柳杉4个家系的愈伤组织诱导量在8月中旬采种时呈明显上升,至8月底时各家系的子叶胚愈伤诱导率达到最高,其中57号家系愈伤诱导率最高,达92%。柳杉4个家系,在不同激素组合中愈伤诱导率存在着一定的差异。其中57号家系子叶胚在DCR+6-BA1.0 mg/L+2,4-D 1.0 mg/L培养时,愈伤组织诱导率达到最高,且诱导出来的愈伤组织状态为白色、干燥、无针状突起,结构紧密。愈伤组织在DCR培养基上成功获得再生植株。